檢測(cè)技術(shù)服務(wù):基于質(zhì)譜的肽和蛋白質(zhì)從頭測(cè)序--檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情

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基于質(zhì)譜的肽和蛋白質(zhì)從頭測(cè)序方法

從頭測(cè)序是一種分析和鑒定肽序列和一些翻譯后修飾的蛋白質(zhì)的方法。與其他一些依賴于已知的蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫(kù)或已知的質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)的分析方法不同，從頭測(cè)序利用串聯(lián)質(zhì)譜根據(jù)肽段的裂解特性直接進(jìn)行分析。未包括在蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)中的肽序列、新物種的蛋白質(zhì)序列和基因組未被測(cè)序的蛋白質(zhì)序列都可以進(jìn)行從頭測(cè)序。采用該方法開(kāi)發(fā)的軟件有PepNovo、PEAKS、pNovo。

基于質(zhì)譜的肽和蛋白質(zhì)從頭測(cè)序基本原理

在質(zhì)譜分析中，待分析物質(zhì)的粒子在通過(guò)電磁場(chǎng)之前被電離。由于不同質(zhì)荷比的離子在電磁場(chǎng)中受到的作用力不同，其運(yùn)動(dòng)軌跡和飛行時(shí)間等分離檢測(cè)離子的特征也不同。找到特定的裂解模式后，根據(jù)質(zhì)譜峰之間的質(zhì)量差和氨基酸的翻譯后修飾情況，可以計(jì)算出相應(yīng)的氨基酸信息。

基于質(zhì)譜的肽和蛋白質(zhì)從頭測(cè)序工作流程

蛋白質(zhì)/肽從頭測(cè)序的工作流程如下：

利用生化分離或親和選擇過(guò)程從樣品組織中提取待分析的蛋白質(zhì)。將該蛋白質(zhì)用相關(guān)的酶（如胰蛋白酶）酶解成肽段；
使用高效液相色譜分離和純化肽消化產(chǎn)物；
在進(jìn)入離子源之前，再利用高壓液相色譜分離和洗滌肽；
肽通過(guò)離子源并轉(zhuǎn)化為帶高電荷的液滴。 脫水后進(jìn)入質(zhì)譜儀生成一級(jí)質(zhì)譜；
計(jì)算機(jī)生成肽的優(yōu)先級(jí)列表；
該多肽被選擇用于下一輪的碎裂。通過(guò)串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)離子在電磁場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)可得到離子的質(zhì)荷比；
在質(zhì)譜儀分析過(guò)程中，具有特定質(zhì)量電荷比的多肽離子代表一定的質(zhì)量；

基于質(zhì)譜的肽和蛋白質(zhì)從頭測(cè)序方法應(yīng)用

該技術(shù)可用于生物樣品中未知多肽序列的分析和檢測(cè)、末端殘基缺失的多肽的檢測(cè)、賴氨酸和亮氨酸的鑒定、N端封閉和環(huán)狀蛋白質(zhì)的鑒定、未知蛋白質(zhì)或多肽序列信息的準(zhǔn)確測(cè)定、商業(yè)修飾的蛋白質(zhì)和酶序列的準(zhǔn)確測(cè)定、穩(wěn)定細(xì)胞系表達(dá)的蛋白質(zhì)序列的準(zhǔn)確測(cè)定以及抗體一級(jí)結(jié)構(gòu)序列的克隆分析等。

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