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檢測(cè)技術(shù)服務(wù):Edman降解的設(shè)計(jì)方法

品牌名稱(chēng): 百泰派克生物科技
業(yè)務(wù)范圍: 技術(shù)服務(wù)
經(jīng)營(yíng)模式: 生產(chǎn)廠商
單價(jià): 面議
發(fā)貨期限: 自買(mǎi)家付款之日起 天內(nèi)發(fā)貨
所在地: 河北 保定
有效期至: 長(zhǎng)期有效
發(fā)布時(shí)間: 2023-12-14 09:15
最后更新: 2023-12-14 09:15
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關(guān)鍵詞:Edman降解的設(shè)計(jì)方法,Edman法測(cè)定氨基酸序列實(shí)驗(yàn),蛋白質(zhì)組學(xué),代謝組學(xué),tmt,抗體測(cè)序,itraq,蛋白質(zhì)譜鑒定,蛋白質(zhì)組學(xué),代謝組學(xué),tmt,抗體測(cè)序,itraq,蛋白質(zhì)譜鑒定

Edman降解(Edman degradation)是鑒定蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的化學(xué)方法,是測(cè)定蛋白質(zhì)、多肽或者氨基酸殘基序列的一種技術(shù)。

通過(guò)預(yù)先完善Edman降解的設(shè)計(jì)方法可在一定程度上提升蛋白測(cè)序試驗(yàn)的成功率,是蛋白質(zhì)測(cè)序過(guò)程中一個(gè)非常重要的步驟。Edman降解的具體設(shè)計(jì)方法主要分為以下幾個(gè)部分。

蛋白質(zhì)裂解過(guò)程:由于Edman降解法不能對(duì)超過(guò)60個(gè)氨基酸的肽段進(jìn)行測(cè)序分析,因此,對(duì)于長(zhǎng)肽段的測(cè)序,需要將長(zhǎng)肽段裂解為氨基酸個(gè)數(shù)在Edman降解的測(cè)序范圍內(nèi)的短肽段。裂解過(guò)程可使用內(nèi)肽酶(如胰蛋白酶或胃蛋白酶)或者化學(xué)試劑(如溴化氰)進(jìn)行。之后依次對(duì)短肽段進(jìn)行測(cè)序,通過(guò)片段間的重疊拼接整體蛋白質(zhì)的序列信息。

Edman反應(yīng)過(guò)程:可將待測(cè)序的蛋白質(zhì)吸附到固體表面上,常見(jiàn)的一種固體基材是涂有聚丁二烯(一種陽(yáng)離子聚合物)的玻璃纖維。將Edman試劑苯基異硫氰酸酯(PITC)與弱堿性緩沖溶液(pH=8.0-9.0,如12%三jiǎ胺)一起添加到吸附的蛋白質(zhì)中,與氨基酸N端的α游離氨基進(jìn)行反應(yīng),形成末端殘基的苯硫代氨基甲?;≒TC)衍生物,即PTC-肽。

加酸裂解:即添加無(wú)水酸(如三氟乙酸)來(lái)選擇性的分離N末端氨基酸,此時(shí)PTC衍生物發(fā)生異構(gòu)化生成替代物苯基硫代乙內(nèi)酰脲,通過(guò)洗脫替代物并進(jìn)行色譜鑒定即可對(duì)得到的氨基酸殘基進(jìn)行檢測(cè)。

蛋白質(zhì)鑒定:重復(fù)以上化學(xué)反應(yīng)循環(huán),將每個(gè)循環(huán)中從蛋白質(zhì)或肽段N末端釋放出的氨基酸經(jīng)過(guò)層析或高效液相色譜法(HPLC)檢測(cè),即可識(shí)別并鑒定所得氨基酸。

百泰派克生物科技采用島津公司Edman測(cè)序系統(tǒng),為廣大科研工作者和科研客戶(hù)提供基于Edman降解的蛋白質(zhì)N端測(cè)序服務(wù)。采用我們的測(cè)序系統(tǒng),可以測(cè)定N端30個(gè)氨基酸的序列信息。采用特定的蛋白上樣系統(tǒng),可以測(cè)定N端的60-70個(gè)氨基酸。百泰派克生物科技也建立了以先jìn的LC-MS/MS技術(shù)進(jìn)行N-端測(cè)序的平臺(tái),可以測(cè)出封閉和修飾的蛋白質(zhì)末端,與基于Edman降解的蛋白質(zhì)N端測(cè)序形成互補(bǔ),保證N端測(cè)序服務(wù)的順利進(jìn)行。


百泰派克生物科技-生物藥物表征,生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商
北京百泰派克生物科技有限公司(Beijing Bio-Tech Pack Technology Company Ltd. 簡(jiǎn)稱(chēng)BTP)從事以生物質(zhì)譜為依托的生物藥物表征,大分子物質(zhì)(包括蛋白質(zhì)、多肽、代謝物)質(zhì)譜分析以及小分子物質(zhì)檢測(cè)服務(wù)。


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