檢測(cè)技術(shù)服務(wù):Pull-down silver stain--檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情

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銀染（silver stain）是對(duì)聚丙烯酰胺凝膠中的蛋白質(zhì)進(jìn)行染色的過(guò)程，在堿性條件下，甲醛可以將蛋白帶上的xiaosuanyin（銀離子）還原成金屬銀，使銀顆粒沉積在蛋白帶上而染色。染色的程度與蛋白中的一些特殊的基團(tuán)有關(guān)，不含或者很少含半胱氨酸殘基的蛋白質(zhì)有時(shí)候呈負(fù)染。

Pull-down銀染（Pull-down silver stain）是將Pull-down樣品進(jìn)行十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰氨凝膠（SDS-PAGE）電泳分離后進(jìn)行銀染的過(guò)程。Pull-down產(chǎn)物進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳后可選擇銀染，銀染相較于考馬斯亮藍(lán)染色具有產(chǎn)物比較少和靈敏度較高等優(yōu)勢(shì)。銀染試劑里不能使用戊二醛，因?yàn)樗鼤?huì)對(duì)蛋白進(jìn)行修飾從而影響后續(xù)的蛋白鑒定。

質(zhì)譜檢測(cè)銀染蛋白膠條的切膠要求：若檢測(cè)單一蛋白條帶，則只切取該蛋白條帶位置即可；若檢測(cè)多個(gè)蛋白條帶，則分別切取后合并；若檢測(cè)整個(gè)泳道蛋白，建議樣品只跑較短時(shí)間濃縮膠或分離膠即可切取檢測(cè)，染色無(wú)需顏色過(guò)深（脫色反而費(fèi)時(shí)），也可直接固定無(wú)需染色。

對(duì)銀染膠條進(jìn)行鑒定是一種定性分析，并不是一種定量分析。通常情況下分析銀染樣本的成功率在90%左右，因?yàn)槟承┿y染過(guò)程會(huì)導(dǎo)致蛋白與聚丙烯酰胺凝膠基質(zhì)發(fā)生交聯(lián)，從而無(wú)法將蛋白從凝膠中提取出來(lái)。當(dāng)銀染樣品中的蛋白含量低于蛋白鑒定所要求的zuì低量時(shí)（大于1ng）則不能用于質(zhì)譜分析。

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百泰派克生物科技-生物藥物表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商
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