一些細(xì)胞和組織可在懸浮狀態(tài)下生長,但相當(dāng)一部分哺乳動物細(xì)胞需要表面貼壁。
因此,用于提供細(xì)胞體外培養(yǎng)環(huán)境的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板和培養(yǎng)皿除了具有良好的透明度和無毒、無菌外,還需經(jīng)表面改性處理使之能夠貼壁、分裂和生長。
細(xì)胞培養(yǎng)瓶特征
厚度均勻,底部無畸變;
密封蓋/濾膜蓋(0.22μm疏水膜);
設(shè)計的瓶蓋可快速旋轉(zhuǎn);
側(cè)面可疊放,更有效地利用培養(yǎng)箱;
無毒,無DNA/RAN酶;
伽馬射線消毒滅菌。
培養(yǎng)瓶主要分類
按細(xì)胞對產(chǎn)品的貼壁要求分為三類:
普通型適合細(xì)胞和組織的懸浮培養(yǎng);
標(biāo)準(zhǔn)型具有良好的細(xì)胞貼壁性能,適用于細(xì)胞的貼壁生長;
型表面含有含氮官能團,能促進某些細(xì)胞(如細(xì)胞)的貼壁、生長和分化。
按瓶子外形分為:
寬體培養(yǎng)瓶;
三角培養(yǎng)瓶;
斜頸培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細(xì)胞能繼續(xù)生長,同時也將細(xì)胞數(shù)量擴大,就必須進行傳代(再培養(yǎng))。
傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞保存下去的方法。
同時也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進行各種實驗的必經(jīng)過程。
懸浮性細(xì)胞直接分瓶就可以,而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。
具體操作步驟如下:
將長滿細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。
加入0.5—1ml 0.25%胰酶溶液,使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。
瓶口塞好橡皮塞,放在倒置鏡下觀察細(xì)胞。
隨著時間的推移,原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時將胰酶棄去,加入10ml培養(yǎng)液終止消化。
觀察消化也可以用肉眼,當(dāng)見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時終止消化。
一般室溫消化時間約為1—3分鐘。
用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液,分到另外兩到三瓶中,實踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞,置37℃下繼續(xù)培養(yǎng)。
第二天觀察貼壁生長情況。
以上是細(xì)胞培養(yǎng)瓶在細(xì)胞傳代中的應(yīng)用,消化液的配制方法如下:稱取0.25克胰酶蛋白酶(活力為1:250),加入100ml無Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解,濾器過濾除菌,4℃保存,用前可在37℃下回溫。
胰酶溶液中也可加入EDTA,使終濃度達(dá)0.02%。
細(xì)胞培養(yǎng)瓶的分類:
培養(yǎng)瓶的瓶頸也有多種樣式,有直頸、斜頸、角度頸、三角形、矩形。
直頸:可以減少培養(yǎng)基因晃動而流到瓶蓋里;
斜頸:易于傾注,移液管或者細(xì)胞刮容易進入瓶體;
角度頸:移液管或者細(xì)胞刮易于進入瓶身,并且可減少培養(yǎng)基因晃動而流到瓶蓋;
三角形:移液管或細(xì)胞刮更易達(dá)到瓶角,寬底增加穩(wěn)定性;
矩形:斜頸的矩形培養(yǎng)瓶瓶底至瓶頸是一個坡度設(shè)計,易于傾注,移液管或者細(xì)胞刮容易進入瓶體,大部分斜頸瓶都有一個裙邊以增加穩(wěn)定性。
直頸和角度頸的矩形培養(yǎng)瓶整個瓶底都是培養(yǎng)面,節(jié)省空間并減少培養(yǎng)基因晃動而流到瓶蓋。
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