一些細胞和組織可在懸浮狀態(tài)下生長,但相當一部分哺乳動物細胞需要表面貼壁。
因此,用于提供細胞體外培養(yǎng)環(huán)境的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板和培養(yǎng)皿除了具有良好的透明度和無毒、無菌外,還需經(jīng)表面改性處理使之能夠貼壁、分裂和生長。
細胞培養(yǎng)瓶特征
厚度均勻,底部無畸變;
密封蓋/濾膜蓋(0.22μm疏水膜);
設計的瓶蓋可快速旋轉(zhuǎn);
側(cè)面可疊放,更有效地利用培養(yǎng)箱;
無毒,無DNA/RAN酶;
伽馬射線消毒滅菌。
細胞培養(yǎng)瓶的分類:
培養(yǎng)瓶的瓶頸也有多種樣式,有直頸、斜頸、角度頸、三角形、矩形。
直頸:可以減少培養(yǎng)基因晃動而流到瓶蓋里;
斜頸:易于傾注,移液管或者細胞刮容易進入瓶體;
角度頸:移液管或者細胞刮易于進入瓶身,并且可減少培養(yǎng)基因晃動而流到瓶蓋;
三角形:移液管或細胞刮更易達到瓶角,寬底增加穩(wěn)定性;
矩形:斜頸的矩形培養(yǎng)瓶瓶底至瓶頸是一個坡度設計,易于傾注,移液管或者細胞刮容易進入瓶體,大部分斜頸瓶都有一個裙邊以增加穩(wěn)定性。
直頸和角度頸的矩形培養(yǎng)瓶整個瓶底都是培養(yǎng)面,節(jié)省空間并減少培養(yǎng)基因晃動而流到瓶蓋。
培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿的區(qū)別
培養(yǎng)瓶適合長期培養(yǎng)、傳代、作為種子細胞。
不易污染。
培養(yǎng)皿和培養(yǎng)板適合在各種實驗中選用,臨時培養(yǎng)。
培養(yǎng)面積T25約為25,T75為75。
6孔板、10/孔。
12孔板4/孔。
培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿的區(qū)別在于,安全系數(shù)的高低、培養(yǎng)細胞數(shù)量的多少。
個人感覺培養(yǎng)瓶的安全系數(shù)更高,操作也比較方便。
培養(yǎng)瓶瓶可以用來做相對大規(guī)模的培養(yǎng)或比較容易被污染的細胞。
而培養(yǎng)皿比較適合小規(guī)模的培養(yǎng)或做一些對照分析實驗。
細胞在細胞培養(yǎng)瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細胞能繼續(xù)生長,同時也將細胞數(shù)量擴大,就必須進行傳代(再培養(yǎng))。
傳代培養(yǎng)也是一種將細胞保存下去的方法。
同時也是利用培養(yǎng)細胞進行各種實驗的必經(jīng)過程。
懸浮性細胞直接分瓶就可以,而貼壁細胞需經(jīng)消化后才能分瓶。
具體操作步驟如下:
將長滿細胞的細胞培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。
加入0.5—1ml 0.25%胰酶溶液,使瓶底細胞都浸入溶液中。
瓶口塞好橡皮塞,放在倒置鏡下觀察細胞。
隨著時間的推移,原貼壁的細胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時將胰酶棄去,加入10ml培養(yǎng)液終止消化。
觀察消化也可以用肉眼,當見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細針孔空隙時終止消化。
一般室溫消化時間約為1—3分鐘。
用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液,分到另外兩到三瓶中,實踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞,置37℃下繼續(xù)培養(yǎng)。
第二天觀察貼壁生長情況。
以上是細胞培養(yǎng)瓶在細胞傳代中的應用,消化液的配制方法如下:稱取0.25克胰酶蛋白酶(活力為1:250),加入100ml無Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解,濾器過濾除菌,4℃保存,用前可在37℃下回溫。
胰酶溶液中也可加入EDTA,使終濃度達0.02%。
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