飛凡檢測(cè)細(xì)胞增值能力檢測(cè) ，細(xì)胞周期檢測(cè) ，活細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)介紹。

活細(xì)胞計(jì)數(shù)是指對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)結(jié)果以每毫升細(xì)胞數(shù)表示。細(xì)胞計(jì)數(shù)的原理和方法與血細(xì)胞計(jì)數(shù)相同。

在細(xì)胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細(xì)胞，總細(xì)胞中活細(xì)胞所占的百分比叫做細(xì)胞活力，由組織中分離細(xì)胞一般也要檢查活力，以了解分離的過程對(duì)細(xì)胞是否有損傷作用。復(fù)蘇后的細(xì)胞也要檢查活力，了解凍存和復(fù)蘇的效果。

用臺(tái)盼蘭染細(xì)胞，死細(xì)胞著色，活細(xì)胞不著色，從而可以區(qū)分死細(xì)胞與活細(xì)胞。利用細(xì)胞內(nèi)某些酶與特定的試劑發(fā)生顯色反應(yīng)，也可測(cè)定細(xì)胞相對(duì)數(shù)和相對(duì)活力。

常用的有平板菌落計(jì)數(shù)法，是根據(jù)每個(gè)活的細(xì)菌能長出一個(gè)菌落的原理設(shè)計(jì)的。取一定容量的菌懸液，作一系列的倍比稀釋，然后將定量的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，根據(jù)培養(yǎng)出的菌落數(shù)，可算出培養(yǎng)物中的活菌數(shù)。此法靈敏度高，是一種檢測(cè)污染活菌數(shù)的方法，也是目前國際上許多國家所采用的方法。使用該法應(yīng)注意：①一般選取菌落數(shù)在30～300之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，過多或過少均不準(zhǔn)確；②為了防止菌落蔓延，影響計(jì)數(shù)，可在培養(yǎng)基中加入0.001%2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。

廣泛應(yīng)用于水、牛奶、食物、藥品等各種材料的細(xì)菌檢驗(yàn)，是最常用的活菌計(jì)數(shù)法。

細(xì)胞周期指細(xì)胞一個(gè)世代所經(jīng)歷的時(shí)間。從一次細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個(gè)周期。細(xì)胞周期反應(yīng)了細(xì)胞增殖速度。細(xì)胞周期是一個(gè)重要的檢測(cè)參數(shù)，研究細(xì)胞周期變化的影響對(duì)于腫瘤的發(fā)展及藥物研發(fā)有著重要的作用。例如，已知抑制有絲分裂的化合物大都用來減緩腫瘤細(xì)胞的生長。

細(xì)胞周期內(nèi)有兩個(gè)階段最為重要：G1 到 S 和 G2 到 M；這兩個(gè)階段正處在復(fù)雜活躍的分子水平變化的時(shí)期，容易受環(huán)境條件的影響，如果能夠人為地進(jìn)行調(diào)控，將對(duì)深入了解生物的生長發(fā)育和控制腫瘤生長等有重要意義。能夠方便有效地檢測(cè)細(xì)胞周期的變化，對(duì)于藥物研發(fā)和疾病研究等都具有重要的意義。

細(xì)胞周期一般有幾種檢測(cè)方法，如流式檢測(cè)法、BrdU(5~溴脫氧尿嘧啶核苷)摻入法及同位素標(biāo)記法等，尤其是其中的流式檢測(cè)法可適用于大量樣品的細(xì)胞周期檢測(cè)，能急速的分析單個(gè)細(xì)胞的多種特性，它是現(xiàn)在最經(jīng)常用到的測(cè)定細(xì)胞周期的一種很有效的方法，以下就其中的流式細(xì)胞儀來進(jìn)行周期分析和測(cè)試。

流式檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)原理：

1、由于細(xì)胞周期各時(shí)相的DNA含量不同，因此，可通過特異性與DNA結(jié)合染料來檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的DNA含量來測(cè)定細(xì)胞周期。

2、流式中常用碘化丙啶(Propidium，簡稱PI)與DNA結(jié)合，其熒光強(qiáng)度與DNA含量成正比。

流式細(xì)胞儀的實(shí)驗(yàn)步驟：

1、收集細(xì)胞 取適量的對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞接種于6cm中，在相應(yīng)的條件下（如藥物）處理相應(yīng)時(shí)間后，倒去培養(yǎng)基，用胰酶適度消化細(xì)胞，離心收集細(xì)胞，棄去上清。

2、清洗及固定細(xì)胞 用PBS清洗細(xì)胞2遍，吸凈離心管殘余的PBS后，加入300μL PBS重懸。

3、洗滌細(xì)胞 次日，離心收集細(xì)胞，用移液槍吸走上清，然后用1mL PBS重懸細(xì)胞并離心清洗2~3遍。

4、RNA酶消化和PI染色 在避光條件下，每個(gè)樣品加入1避光 RNase （10mg/mL）和5和mg/m（5mg/mL）混勻后室溫避光條孵育30min。

5、上機(jī)檢測(cè) 將檢測(cè)樣品轉(zhuǎn)移到5mL的流式管后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期，采用flowjo或modifit軟件進(jìn)行DNA含量分析。

飛凡檢測(cè)生物依托擁有多年服務(wù)經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)和先進(jìn)的儀器設(shè)備，并嚴(yán)格按照《干細(xì)胞制劑制備與質(zhì)檢行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（試行）》中提及的10種必檢項(xiàng)目及檢測(cè)要求，快速地為客戶提供全方位的干細(xì)胞質(zhì)量檢測(cè)服務(wù)。

質(zhì)量檢測(cè)是為了保證干細(xì)胞經(jīng)特定體外處理后對(duì)其安全性、有效性和質(zhì)量可控性進(jìn)行較全面的質(zhì)量檢測(cè)，包括但不限以下10各方面：

細(xì)胞鑒別：細(xì)胞形態(tài)、遺傳學(xué)、代謝酶亞型譜分析、表面標(biāo)志物鑒定、特定基因表達(dá)產(chǎn)物鑒定。

存活率及生長活性：活細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞倍增時(shí)間檢測(cè)、細(xì)胞周期檢測(cè)、克隆形成率、端粒酶活性檢測(cè)等。

純度和均一性：細(xì)胞表面標(biāo)志物鑒定、遺傳多態(tài)性、特定生物學(xué)活性。

無菌試驗(yàn)和支原體檢測(cè)：依據(jù)現(xiàn)行版《中華人民共和國藥典》中的生物制品無菌試驗(yàn)和支原體檢測(cè)流程。

細(xì)胞內(nèi)外源致病因子檢測(cè)：牛源特定病毒的檢測(cè)（如使用過牛血清）；豬源細(xì)小病毒檢測(cè)（如使用過胰酶等豬源材料等。

內(nèi)毒素檢測(cè)：應(yīng)根據(jù)現(xiàn)行版《中華人民共和國藥典》中的內(nèi)毒素檢測(cè)流程。

異常免疫學(xué)反應(yīng)（異體來源）：對(duì)人總淋巴細(xì)胞增殖、對(duì)不同淋巴細(xì)胞亞群增殖能力的影響、對(duì)相關(guān)細(xì)胞因子分泌的影響。

致瘤性：免疫缺陷動(dòng)物體內(nèi)致瘤試驗(yàn)。

生物學(xué)效力試驗(yàn)：檢測(cè)干細(xì)胞分化潛能、誘導(dǎo)分化細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和生理功能、對(duì)免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)能力、分泌特定細(xì)胞因子、表達(dá)特定基因和蛋白。

培養(yǎng)基及其他添加成分殘余量檢測(cè)：牛血清蛋白、抗生素、細(xì)胞因子等殘留檢測(cè)。